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PASOS
1º PASO: En un mortero machacar la hoja añadiendo nitrógeno líquido para que se desquebraje. Después, lo metemos en un pequeño bote.
2ºPASO: Añadimos un reactivo que rompa las células y extraiga el ADN de la hoja y lo ponemos en una centrifugadora.
3º PASO: Hay que pesar la agarosa y añadir el tampón TBE. Es muy importante que sea de forma proporcionada. Después, metemos la mezcla en el microondas hasta que hierva.
4º PASO: Vertemos la solución en un portageles que nos servirá de molde y colocamos un peine para formar los pozillos en los que se depositará la muestra.
5º PASO: Mientras el gel se solidifica se preparan las muestras, hay que añadir el tampón de carga al ADN previamente extraido.
6º PASO: Cuando el gel de agarosa ya a solidificado hay que extraer el peine y se mete en la cubeta de electroforésis. Dentro de la cubeta el gel tiene que estar cubierto por tampón TBE.
7º PASO: Ahora hay que colocacar las muestras en cada uno de los pozillos formados en el gel. Después, se enciende la corriente en la cubeta de electroforésis.
8º PASO: Cuando ha separación a terminado hay que teñir el gel con bromuro de etidio durante 20 minutos. Es muy importante manipularlo con guantes porque es un agente mutagénico.
9º PASO: Ahora hay que iluminar el gel con luz ultravioleta para poder observar los fragmentos de ADN separados. Con la camara de la luz se puede observar en un ordenador.
10º PASO: Para interpretar los resultados hay que compararlos con un patrón de tamaños conocidos.
